Fläschchen mit Flüssigkultur

GEBRAUCHSANWEISUNG FÜR DIE FLÜSSIGKULTURFLASCHEN

1) Enthalten:

- Mycomate® Flüssigkultur-Fläschchen

- Sterile Alkoholtupfer

- Sterile Spritze und 18-Gauge-Nadel - Flüssigkulturfläschchen

2) Sie benötigen:

- Gasflamme (ein fackelartiges Feuerzeug funktioniert gut).

- Die Sporen, die du in das Fläschchen mit der Flüssigkultur injizieren willst.

- Saubere Hände und ein sauberer Arbeitsbereich.

3) Inokulation:

Injektion und Kolonisierung der Flüssigkultur:

1) Wenn das flüssige Kulturmedium gekühlt ist, nehmen Sie es 24 Stunden vor der Verwendung aus dem Kühlschrank und lagern es bei Raumtemperatur.

2) Die Hände gründlich waschen (die Verwendung von antibakterieller Seife ist fakultativ). Mit einem sauberen Handtuch (z. B. Papierhandtüchern) abtrocknen.

3) Nehmen Sie das Fläschchen aus dem Beutel und legen Sie es auf einen sauberen Tisch in einem sauberen, rückstandsfreien Bereich.

4) Alkohol auf die Injektionsöffnung des Flüssigkulturfläschchens und jede andere für die Injektion vorgesehene Stelle (z. B. Sporenfläschchen oder Flüssigkulturfläschchen) auftragen. Verwenden Sie für jedes zu befeuchtende Produkt einen sauberen Tupfer, um eine gegenseitige Kontamination zu vermeiden. Atmen Sie nicht direkt auf die Injektionsstellen aus.

5) Nehmen Sie die Spritze und die Nadel aus dem Beutel. Entfernen Sie die Kunststoffabdeckung zum Schutz der Nadel (im Uhrzeigersinn drehen und abziehen).

Achten Sie darauf, dass die Nadel nicht mit einem Gegenstand in Berührung kommt, da sie sonst erneut sterilisiert werden muss. Wenn eine Spritze eines anderen Anbieters verwendet wird, muss auch diese sterilisiert werden.

Die Nadeln können mit einer Flamme sterilisiert werden. Es ist wünschenswert, dass die Nadel glühend heiß ist, wobei darauf zu achten ist, dass die Stelle, an der die Nadel mit dem Kunststoff verbunden ist, nicht überhitzt wird und schmilzt. Lassen Sie die Nadel vor der Injektion immer abkühlen (siehe Foto a).

6) Wenn Sie ein Fläschchen mit Sporen oder kolonisierter Flüssigkultur verwenden, schütteln Sie es kräftig, um die Suspension zu mischen. Halten Sie das Fläschchen schräg, injizieren Sie mit der Spritze und ziehen Sie die gewünschte Menge der Suspension auf (siehe Foto b).

7) Spritzen Sie einige Tropfen der Kultursuspension (d. h. kolonisierte Flüssigkeit aus dem Kulturfläschchen) oder zwischen einigen Tropfen und 1 ml Sporensuspension (je nach Dichte der Sporenlösung) in das Flüssigkulturfläschchen. Ziehen Sie die Nadel sehr langsam zurück, da sonst durch den Druck ein Teil der Flüssigkeit herausspritzen kann, was kein Problem darstellt (siehe Foto c).

8) Reinigen Sie die Injektionsöffnung des Flüssigkulturfläschchens mit einem sauberen, mit Alkohol angefeuchteten Tupfer, lassen Sie sie trocknen und bewahren Sie sie aufrecht in einem luftdichten Plastikbeutel auf.

9) Schütteln Sie das Fläschchen einmal täglich zehn Sekunden lang kräftig und bewahren Sie es vor Sonnenlicht geschützt auf. Bebrüten Sie die Pilzart bei einer geeigneten Temperatur (im Allgemeinen 23-27 °C). Eine niedrigere Temperatur verzögert die Keimung und die Besiedlungszeit der Sporen. Eine zu hohe Temperatur (über 27 °C) erhöht jedoch das Risiko einer Kontamination (siehe Foto d).

Hinweis: Die Temperaturanforderungen hängen von der jeweiligen Art ab.

10) Das Wachstum ist bei Sporen und Flüssigkultur ähnlich. Allerdings dauert das Wachstum mit Sporen länger als mit Flüssigkultur.

Sporensuspension: Die Sporen benötigen im Allgemeinen 24-72 Stunden zum Keimen, und innerhalb von 3-7 Tagen sollte die Besiedlung des flüssigen Mediums in den unteren zwei Dritteln des Fläschchens zu beobachten sein.

Hinweis: MycoMate® Liquid Culture Vials benötigen nur sehr wenige Sporen für das Wachstum.

Flüssigkultur: Das Wachstum ist innerhalb von 24 Stunden nach Übertragung des Myzels von einem kolonisierten Flüssigkultur-Fläschchen auf frische Flüssigkultur-Fläschchen erkennbar. Frische Fläschchen sind in der Regel nach einigen Tagen kolonisiert (je nach Art, Stamm und Temperatur).

Die Beobachtung ist am effektivsten, wenn das Fläschchen vorsichtig gegen das Licht gehalten wird, ohne es zu schütteln. Das Sediment im Kulturmedium kann aufgewirbelt werden, wenn man nicht vorsichtig genug ist, was die Erkennung des Wachstums erschwert (dies ist kein Problem, da sich das Sediment nach einer Weile wieder auf dem Boden absetzt). Wenn Sie das Fläschchen anheben, schwimmen weiße Fäden des Myzels (Pilzes) an die Oberfläche. Um das Myzel herum sollte eine kleine Trübung zu sehen sein, aber das ganze Fläschchen sollte nicht undurchsichtig sein. Der Bereich um die Trübung des Myzels sollte einigermaßen klar sein. Wenn das Fläschchen langsam angehoben wird und dennoch völlig undurchsichtig erscheint, ist es möglicherweise kontaminiert. Lassen Sie das Fläschchen mehrere Stunden lang ungestört stehen und prüfen Sie es erneut, um auszuschließen, dass es sich um Sedimente vom Boden handelt, die das Fläschchen verunreinigt haben. Diese kann verwendet werden, sobald ein gesundes Wachstum zu beobachten ist oder nach ein bis zwei Wochen, wenn das Fläschchen eine verstärkte Besiedlung aufweist.

Hinweis: Wenn ein bis zwei Drittel des Fläschchens kolonisiert sind, sollte es verwendet oder zur späteren Verwendung gekühlt gelagert werden (siehe unten).

11) Wenn die Kolonisierung abgeschlossen ist, kann das Fläschchen zur Beimpfung anderer MycoMate® Flüssigkultur-Fläschchen (Wiederholung der Schritte 1 bis 10), MycoMate® Speisepilz-Kits oder Sklerotien (Wiederholung der Schritte 1 bis 6) verwendet werden.

4) Lagerung:

MycoMate® Liquid Culture Vials können für die Lagerung von Kurz- und Langzeitkulturen verwendet werden, einschließlich Multisporen, Isolate oder geklonte Sorten. Ein Flüssigkultur-Fläschchen kann zur Herstellung von Tausenden weiterer Kulturen verwendet werden. Sobald das Fläschchen beimpft wurde und das Myzel 30 bis 65 % des flüssigen Mediums besiedelt hat, kann es mehrere Monate (oder länger) ohne schädliche Auswirkungen kühl gelagert werden (zwischen 2 °C und 8 °C). Lagern Sie die Kulturen senkrecht in zwei oder drei hermetisch verschlossenen Plastikbeuteln. Ein Schütteln der Kulturen ist während dieser Zeit nicht erforderlich.

Sparen Sie wertvolle Zeit: Wenn die Flüssigkultur benötigt wird, nehmen Sie das Fläschchen einfach aus dem Kühlschrank und verwenden es.