Sous terre

TERRAIN

Kit de culture de truffes

Instructions :

NE PAS RETIRER LE BOUCHON MICROFILTRÉ DU SAC DE SUBSTRAT.

1) Le kit comprend

Un sac microfiltré avec un substrat de croissance et un port d'injection.

Flacon de culture liquide de 5 ml.

Tampon d'alcool stérile.

Seringue stérile.

2) Vous aurez besoin de

Une flamme de gaz (un briquet de type chalumeau fonctionne bien).

Des mains propres et un endroit propre pour travailler.

Les spores à inoculer dans le kit.

3) Inoculation :

Vous avez deux possibilités pour inoculer le kit truffe :

A; les spores :

Vous pouvez injecter les spores directement dans le milieu de culture. Cette option demande un peu moins de travail, mais il faut plus de temps pour que le kit fructifie et il n'y a pas toujours assez de spores qui germent. Si vous choisissez cette option, passez directement à l'étape 1 (voir ci-dessous).

B; culture liquide :

Pour une colonisation plus rapide et des rendements plus élevés, vous devez d'abord inoculer et coloniser un flacon de culture liquide, puis injecter la culture liquide dans le sac de substrat de croissance. Les spores produisant des truffes peuvent avoir besoin de plus de temps pour germer sur le grain que les spores produisant des champignons, de sorte que la culture liquide peut servir de raccourci. Si vous avez choisi cette option, suivez les étapes B1 à B10, sinon passez directement au point 1).

B1) Si le milieu de culture liquide est réfrigéré, le sortir du réfrigérateur et le conserver à température ambiante pendant 24 heures avant de l'utiliser.

B2) Se laver soigneusement les mains (l'utilisation d'un savon antibactérien est facultative). Séchez-les avec une serviette propre (par exemple, du papier absorbant).

B3) Retirez le flacon de la pochette et placez-le sur une table propre dans un endroit propre et sans débris.

B4) Appliquer de l'alcool sur l'orifice d'injection du flacon de culture liquide et sur tout autre site destiné à l'injection (par exemple, flacon de spores ou flacon de culture liquide). Utilisez un tampon propre pour chaque produit à humidifier, afin de réduire la contamination mutuelle. Ne pas expirer directement sur les sites d'injection.

B5) Retirez la seringue et l'aiguille du sachet. Retirez le couvercle en plastique protégeant l'aiguille (tournez dans le sens des aiguilles d'une montre et tirez).

Ne laissez pas l'aiguille entrer en contact avec un objet quelconque, sinon elle doit être re-stérilisée. Si une seringue d'un autre fournisseur est utilisée, elle doit également être stérilisée.

Les aiguilles peuvent être stérilisées à la flamme. Il est souhaitable que l'aiguille soit chauffée au rouge, en veillant à ne pas surchauffer et à ne pas faire fondre la zone où l'aiguille est fixée au plastique. Laissez toujours l'aiguille refroidir avant de procéder à l'injection.

B6) Si vous utilisez un flacon de spores ou de culture liquide colonisée, agitez vigoureusement pour mélanger la suspension. Tenir le flacon en biais, injecter avec la seringue et aspirer la quantité de suspension souhaitée.

B7) Injecter plusieurs gouttes de suspension de culture (c'est-à-dire le liquide colonisé provenant de la fiole de culture) ou entre quelques gouttes et 1 ml de suspension de spores (en fonction de la densité de la solution de spores) dans la fiole de culture liquide. Retirer l'aiguille très lentement, sinon la pression peut entraîner la projection d'une partie du liquide, ce qui n'est pas un problème.

B8) Essuyer l'orifice d'injection de la fiole de culture liquide avec un tampon propre imbibé d'alcool ; laisser sécher et conserver en position verticale dans un sac en plastique hermétique.

B9) Agiter vigoureusement le flacon une fois par jour pendant dix secondes et le conserver à l'abri de la lumière du soleil. Incuber les espèces de champignons à la température appropriée (généralement 23-27°C). Une température plus basse retarde la germination et la colonisation des spores. En revanche, une température trop élevée (supérieure à 27°C) augmente le risque de contamination.

Remarque : les exigences en matière de température dépendent de l'espèce.

B10) La croissance est similaire avec les spores et la culture liquide. Cependant, la croissance avec les spores prend plus de temps qu'avec la culture en milieu liquide.

Suspension de spores : les spores mettent généralement 24 à 72 heures pour germer et, dans les 3 à 7 jours, la colonisation du milieu liquide doit être observable dans les deux tiers inférieurs de la fiole.

Note : Les flacons de culture liquide MycoMate® ne nécessitent que très peu de spores pour la croissance.

Culture liquide : la croissance est évidente dans les 24 heures suivant le transfert du mycélium d'un flacon de culture liquide colonisé dans des flacons de culture liquide frais. Les flacons frais sont généralement colonisés après plusieurs jours (en fonction de l'espèce, de la souche et de la température).

L'observation est plus efficace lorsque le flacon est tenu soigneusement à l'abri de la lumière, en évitant de le secouer. Le sédiment dans le milieu de culture peut s'agiter si vous n'êtes pas assez attentif, ce qui rend plus difficile l'identification de la croissance (ce n'est pas un problème, car le sédiment se déposera de nouveau au fond après un certain temps). Des fils blancs de mycélium (champignon) flottent à la surface lorsque vous soulevez la fiole. Il doit y avoir un léger trouble autour du mycélium, mais l'ensemble de la fiole ne doit pas être opaque. La zone entourant le trouble du mycélium doit être raisonnablement claire. Si la cuvette est soulevée lentement et apparaît pourtant complètement opaque, il est possible qu'elle soit contaminée. Laissez la fiole reposer pendant plusieurs heures et vérifiez à nouveau si le sédiment du fond n'a pas obscurci la fiole. Cette méthode peut être utilisée dès qu'il y a une croissance saine ou après une ou deux semaines lorsque le flacon montre une colonisation accrue.

Remarque : lorsqu'un à deux tiers du flacon ont été colonisés, il convient de l'utiliser ou de le conserver au réfrigérateur en vue d'une utilisation ultérieure (voir ci-dessous).

B11) Lorsque la colonisation est terminée, la fiole peut être utilisée pour inoculer d'autres fioles de culture liquide MycoMate® (en répétant les étapes B1 à B10), des kits de champignons comestibles MycoMate® ou des sclérotes (en répétant les étapes B1 à B6).

1) Tenir l'orifice d'injection du sac de substrat d'une main, soulever les deux languettes en plastique de l'autre main et déchirer avec précaution le couvercle en plastique protégeant l'orifice d'injection. Appliquez de l'alcool à l'aide d'un tampon propre et laissez sécher.

2) Retirer la seringue et l'aiguille du sac, enlever le couvercle en plastique protégeant l'aiguille (tourner dans le sens des aiguilles d'une montre). Ne laissez pas l'aiguille entrer en contact avec un objet quelconque, sinon vous devrez la stériliser à nouveau.

Les eaux peuvent être stérilisées à l'aide d'une flamme, il est souhaitable que l'aiguille soit chauffée au rouge, en veillant à ne pas surchauffer et faire fondre la zone où l'aiguille est attachée au plastique, laissez l'aiguille refroidir avant de l'injecter. Évitez d'expirer au-dessus de l'aiguille ou de la zone d'injection.

3) Introduisez l'aiguille de la seringue dans l'orifice d'injection du sac de substrat.

Spores : Utilisez l'orifice d'injection pour guider l'aiguille et injectez 1 à 2 ml dans chaque coin et parallèlement aux côtés du sac de substrat. Inclure plusieurs gouttes sur le substrat lui-même. Plus l'injection dans le substrat est uniforme, plus la colonisation sera rapide.

Culture liquide : utilisez l'orifice d'injection pour guider l'aiguille et injectez 1 à 2 gouttes dans chaque coin et parallèlement aux côtés du sac de substrat. Laissez la solution s'égoutter sur les côtés du sac de substrat. Inclure plusieurs gouttes sur le substrat lui-même. Chaque goutte de culture représente un point de croissance, donc plus l'injection dans le substrat est uniforme, plus la colonisation sera rapide.

4) Colonisation :

La température appropriée pour l'incubation du sac de substrat se situe entre 22°C et 24°C.

Spores : dans un délai de quelques jours à deux semaines, les spores germent (petits amas cotonneux) et le champignon colonise le sac pendant plusieurs semaines. Si la germination n'est pas uniformément répartie dans le sac au cours des 14 à 22 jours suivants, vous pouvez accélérer la colonisation en mélangeant soigneusement le contenu du sac. Ne le faites qu'une seule fois, afin que les champignons puissent achever leur colonisation.

Culture liquide : dans les 24 à 72 heures, le champignon prend vie et colonise le substrat en l'espace d'une à deux semaines, selon l'espèce et la variété.

5) Récolte :

Bien que vous puissiez commencer à récolter les truffes plus tôt, il est conseillé d'attendre au moins 12 à 24 semaines avant de les récolter. Plus l'attente est longue, plus le rendement est élevé et plus les truffes sont grosses. La vitesse de colonisation, le rendement et les caractéristiques varient d'une variété et d'une espèce à l'autre.

L'Underground produira plus de 100 grammes de truffes fraîches en quelques mois.