Flacon de culture liquide

INSTRUCTIONS POUR L'UTILISATION DES FLACONS DE CULTURE LIQUIDE

1) Inclus:

-  Flacon de culture liquide Mycomate®

-  Tampons alcoolisés stériles

-  Seringue stérile et aiguille de calibre 18 - Flacon de culture liquide

2) Tu auras besoin:

- Flamme à gaz (un briquet "type torche" fonctionne bien)

- Les spores que vous souhaitez injecter dans le flacon de culture liquide.

- Des mains propres et un espace de travail propre

3) Inoculation:

Injection et colonisation de culture liquide :

1) Si le milieu de culture liquide est réfrigéré, sortez-le du réfrigérateur et conservez-le à température ambiante 24 heures avant utilisation.

2) Lavez-vous très bien les mains (l'utilisation de savon antibactérien est facultative). Séchez avec une serviette propre (par exemple des serviettes en papier).

3) Retirez le flacon du sac et placez-le sur une table propre dans un endroit propre, exempt de débris.

4) Appliquez de l'alcool sur le port d'injection du flacon de culture liquide et sur tout autre site destiné à l'injection (par exemple flacon de spores ou flacon de culture liquide). Utilisez un écouvillon propre pour chaque produit à humidifier, afin de réduire la contamination mutuelle. N'expirez pas directement au-dessus des sites d'injection.

5) Retirez la seringue et l'aiguille du sac. Retirez le couvercle en plastique qui protège l'aiguille (tournez dans le sens des aiguilles d'une montre et tirez).

Ne laissez pas l'aiguille entrer en contact avec un objet, sinon elle devra être restérilisée. Si une seringue d'un autre fournisseur est utilisée, elle doit également être stérilisée.

Les aiguilles peuvent être stérilisées à la flamme. Vous voulez que l'aiguille soit chauffée au rouge, en faisant attention de ne pas surchauffer et de ne pas faire fondre la zone où l'aiguille est attachée au plastique. Laissez toujours l'aiguille refroidir avant de l'injecter. (Voir photo a).

6)Si une culture liquide colonisée ou un flacon de spores est utilisé, agiter vigoureusement pour mélanger la suspension. Tenez le flacon incliné, injectez avec la seringue et prélevez la quantité de suspension souhaitée. (Voir photo b).

7) Injecter plusieurs gouttes de suspension de culture (c'est-à-dire le liquide colonisé du flacon de culture) ou entre plusieurs gouttes et 1 ml de suspension de spores (selon la densité de la solution de spores) dans le flacon de culture liquide. Retirez l'aiguille très lentement, sinon la pression peut faire gicler une partie du liquide, ce qui n'est pas un problème. (Voir photo c).

8) Nettoyez le port d'injection du flacon de culture liquide avec un coton-tige propre imbibé d'alcool ; laisser sécher et conserver debout dans un sac en plastique à fermeture éclair.

9) Agiter vigoureusement le flacon une fois par jour pendant dix secondes et conserver à l'abri de la lumière du soleil. Incuber les espèces fongiques à la température appropriée (généralement entre 23° et 27° C). Une température plus basse retarde le temps de germination et de colonisation des spores. Cependant, une température trop élevée (supérieure à 27 ºC) augmente le risque de contamination (voir photo d).

Remarque : Les exigences de température dépendent de l'espèce.

10) La croissance est similaire à la fois avec les spores et avec la culture liquide. Cependant, la croissance avec des spores prend plus de temps qu'avec ces dernières.

Suspension de spores : les spores mettent généralement 24 à 72 heures pour germer, et la colonisation du milieu liquide doit être observable dans les 3 à 7 jours qui se développent dans les deux tiers inférieurs du flacon.

Remarque : Les flacons de culture liquide MycoMate® nécessitent très peu de spores pour leur croissance.

Culture liquide : La croissance est évidente dans les 24 heures suivant le transfert du mycélium d'un flacon de culture liquide colonisé vers des flacons de culture liquide frais. Les flacons frais sont généralement colonisés après plusieurs jours (selon l'espèce, la variété et la température).

L'observation est plus efficace lorsque le flacon est soigneusement tenu face à la lumière, en évitant de le secouer. Le sédiment dans le milieu de culture peut être agité si vous ne faites pas assez attention, ce qui rend plus difficile l'identification de la croissance (ce n'est pas un problème, car après un certain temps, le sédiment se déposera au fond). Des brins blancs de mycélium (champignon) flotteront à la surface lorsque vous soulevez le flacon. Il devrait y avoir un peu de trouble autour du mycélium, mais l'ensemble du flacon ne devrait pas être trouble. La zone autour de la nébulosité du mycélium doit être raisonnablement transparente. Si le flacon est soulevé lentement et semble pourtant complètement opaque, il peut être contaminé. Laissez le flacon reposer sans être dérangé pendant plusieurs heures et vérifiez à nouveau si ce sont des sédiments du fond qui ont obscurci le flacon. Cela peut être utilisé dès qu'il y a une croissance saine ou après une à deux semaines lorsque le flacon montre une colonisation accrue.

Remarque : Lorsqu'entre un et deux tiers du flacon a été colonisé, il doit être utilisé ou conservé au réfrigérateur pour une utilisation ultérieure (voir ci-dessous).

11) Une fois la colonisation terminée, le flacon peut être utilisé pour inoculer d'autres flacons de culture liquide MycoMate® (répéter les étapes 1 à 10), les kits MycoMate® pour champignons comestibles ou sclérotes (répéter les étapes 1 à 6)

4) stockage:

Les flacons de culture liquide MycoMate® peuvent être utilisés pour le stockage de cultures à court et à long terme, y compris les variétés multispores, isolées ou clonées. Un flacon de culture liquide peut être utilisé pour en produire des milliers d'autres. Une fois le flacon ensemencé, et que le mycélium colonise entre 30% et 65% du milieu liquide, il peut être conservé sous réfrigération (entre 2º et 8º C) pendant plusieurs mois (voire plus) sans percevoir d'effets nocifs. Conserver debout dans deux ou trois sacs en plastique hermétiquement fermés. L'agitation des cultures n'est pas nécessaire pendant cette période.

Gagnez un temps précieux : lorsqu'une culture liquide est requise, il vous suffit de retirer le flacon du réfrigérateur et de l'utiliser.