Metropolitana

SOTTERRANEO

Kit per la coltivazione del tartufo

Istruzioni:

NON RIMUOVERE IL TAPPO MICROFILTRATO DAL SACCHETTO DEL SUBSTRATO.

1) Il kit comprende:

Sacchetto microfiltrato con substrato di crescita e porta di iniezione.

Fiala di coltura liquida da 5 ml.

Tampone alcolico sterile.

Siringa sterile.

2) Sono necessari

Fiamma a gas (va bene un accendino tipo fiamma ossidrica).

Mani pulite e un'area pulita in cui lavorare.

Le spore che si vogliono inoculare nel kit.

3) Inoculazione:

Avete due opzioni per inoculare il kit di tartufi:

A; spore:

È possibile iniettare le spore direttamente nel terreno di coltura. Questa opzione è un po' meno laboriosa, ma richiede più tempo per la fruttificazione del kit e non sempre germinano abbastanza spore. Se si sceglie questa opzione, passare direttamente alla fase 1 (vedi sotto).

B; coltura liquida:

Per una colonizzazione più rapida e una maggiore resa, è consigliabile inoculare e colonizzare prima una fiala di coltura liquida e poi iniettare la coltura liquida nel sacchetto del substrato di crescita. Le spore produttrici di tartufo possono richiedere più tempo per germinare sui cereali rispetto alle spore produttrici di funghi, quindi la coltura liquida può servire come scorciatoia. Se questa è l'opzione scelta, seguire i passaggi da B1 a B10, altrimenti passare direttamente al punto 1).

B1) Se il terreno di coltura liquido è refrigerato, toglierlo dal frigorifero e conservarlo a temperatura ambiente per 24 ore prima dell'uso.

B2) Lavare accuratamente le mani (l'uso di sapone antibatterico è facoltativo). Asciugare con un asciugamano pulito (ad es. carta assorbente).

B3) Rimuovere la fiala dalla busta e posizionarla su un tavolo pulito in un'area pulita e priva di detriti.

B4) Applicare l'alcol sulla porta di iniezione della fiala per coltura liquida e su qualsiasi altro sito destinato all'iniezione (ad es. fiala di spore o fiala per coltura liquida). Utilizzare un tampone pulito per ogni prodotto da bagnare, al fine di ridurre la contaminazione reciproca. Non espirare direttamente sui siti di iniezione.

B5) Estrarre la siringa e l'ago dalla busta. Rimuovere il coperchio di plastica che protegge l'ago (girare in senso orario e tirare).

L'ago non deve entrare in contatto con alcun oggetto, altrimenti deve essere risterilizzato. Se si utilizza una siringa di un altro fornitore, anche questa deve essere sterilizzata.

Gli aghi possono essere sterilizzati con una fiamma. È auspicabile che l'ago sia caldo, facendo attenzione a non surriscaldare e a non fondere l'area in cui l'ago è attaccato alla plastica. Lasciare sempre raffreddare l'ago prima di iniettare.

B6) Se si utilizza una fiala per coltura liquida di spore o colonie, agitare vigorosamente per miscelare la sospensione. Tenere la fiala inclinata, iniettare con la siringa e prelevare la quantità di sospensione desiderata.

B7) Iniettare alcune gocce di sospensione colturale (cioè il liquido colonizzato dalla fiala di coltura) o tra alcune gocce e 1 ml di sospensione di spore (a seconda della densità della soluzione di spore) nella fiala di coltura liquida. Estrarre l'ago molto lentamente, altrimenti la pressione potrebbe far fuoriuscire parte del liquido, il che non costituisce un problema.

B8) Pulire la porta di iniezione della fiala per coltura liquida con un tampone pulito inumidito con alcol; lasciare asciugare e conservare in posizione verticale in un sacchetto di plastica ermetico.

B9) Agitare energicamente la fiala una volta al giorno per dieci secondi e conservarla al riparo dalla luce solare. Incubare le specie di funghi alla temperatura appropriata (generalmente 23-27°C). Una temperatura più bassa ritarda la germinazione e la colonizzazione delle spore. Tuttavia, una temperatura troppo elevata (superiore a 27°C) aumenta il rischio di contaminazione.

Nota: i requisiti di temperatura dipendono dalla specie.

B10) La crescita è simile sia con le spore che con la coltura liquida. Tuttavia, la crescita con le spore richiede più tempo rispetto alla coltura liquida.

Sospensione di spore: le spore impiegano generalmente 24-72 ore per germinare ed entro 3-7 giorni si dovrebbe osservare la colonizzazione del terreno liquido nei due terzi inferiori della fiala.

Nota: le fiale di coltura liquida MycoMate® richiedono pochissime spore per crescere.

Coltura liquida: la crescita è evidente entro 24 ore dal trasferimento del micelio da una fiala di coltura liquida colonizzata a fiale di coltura liquida fresche. Le fiale fresche sono generalmente colonizzate dopo alcuni giorni (a seconda della specie, del ceppo e della temperatura).

L'osservazione è più efficace se la fiala viene tenuta accuratamente in controluce, evitando di scuoterla. Il sedimento nel terreno di coltura può agitarsi se non si fa abbastanza attenzione, rendendo più difficile l'identificazione della crescita (non è un problema, perché il sedimento si depositerà di nuovo sul fondo dopo un po'). Quando si solleva la fiala, i fili bianchi del micelio (fungo) galleggiano in superficie. Dovrebbe esserci una piccola nuvolosità intorno al micelio, ma l'intera fiala non dovrebbe essere opaca. L'area intorno all'intorbidamento del micelio dovrebbe essere ragionevolmente chiara. Se la fiala viene sollevata lentamente e appare completamente opaca, è possibile che sia contaminata. Lasciare riposare la fiala indisturbata per alcune ore e ricontrollare per escludere che siano stati i sedimenti del fondo a oscurare la fiala. Si può utilizzare non appena si nota una crescita sana o dopo una o due settimane quando la fiala mostra un aumento della colonizzazione.

Nota: quando uno o due terzi della fiala sono stati colonizzati, è opportuno utilizzarla o conservarla in frigorifero per un uso successivo (vedi sotto).

B11) Una volta completata la colonizzazione, la fiala può essere utilizzata per inoculare altre fiale di coltura liquida MycoMate® (ripetendo i passaggi da B1 a B10), kit di funghi commestibili MycoMate® o sclerozi (ripetendo i passaggi da B1 a B6).

1 ) Tenere la porta di iniezione del sacchetto di substrato con una mano, sollevare le due linguette di plastica con l'altra mano e strappare con cautela il coperchio di plastica che protegge la porta di iniezione. Applicare l'alcol con un tampone pulito e lasciare asciugare.

2) Estrarre la siringa e l'ago dalla busta, rimuovere il coperchio di plastica che protegge l'ago (girare in senso orario). Non lasciare che l'ago venga a contatto con alcun oggetto, altrimenti sarà necessario risterilizzarlo.

Le acque possono essere sterilizzate con una fiamma, è auspicabile che l'ago sia rovente, facendo attenzione a non surriscaldare e a non fondere la zona in cui l'ago è attaccato alla plastica; lasciare raffreddare l'ago prima di iniettarlo. Evitare di espirare sull'ago o sull'area di iniezione.

3 ) Spingere l'ago della siringa attraverso la porta di iniezione della sacca del substrato.

Spore: utilizzare la porta di iniezione per guidare l'ago e iniettare da 1 a 2 ml in ogni angolo e parallelamente ai lati del sacchetto di substrato. Includere diverse gocce sul substrato stesso. Più uniforme è l'iniezione nel substrato, più rapida sarà la colonizzazione.

Coltura liquida: utilizzare la porta di iniezione per guidare l'ago e iniettare 1 o 2 gocce in ogni angolo e parallelamente ai lati del sacchetto del substrato. Lasciare che la soluzione goccioli sui lati del sacchetto del substrato. Includere diverse gocce sul substrato stesso. Ogni goccia di coltura rappresenta un punto di crescita, quindi più uniforme è l'iniezione nel substrato, più rapida sarà la colonizzazione.

4) Colonizzazione:

La temperatura adatta per l'incubazione del sacchetto di substrato è compresa tra 22°C e 24°C.

Spore: nel giro di alcuni giorni o due settimane le spore germineranno (piccoli grumi dall'aspetto cotonoso) e il fungo colonizzerà il sacchetto nel corso di diverse settimane. Se la germinazione non è distribuita uniformemente in tutto il sacchetto nei successivi 14-22 giorni, è possibile accelerare la colonizzazione mescolando con cura il contenuto del sacchetto. Fatelo solo una volta, in modo che i funghi possano completare la colonizzazione.

Coltura liquida: nel giro di 24-72 ore il fungo nasce e in una o due settimane colonizza il substrato, a seconda della specie e della varietà.

5) Raccolta:

Anche se è possibile iniziare a raccogliere i tartufi in anticipo, è consigliabile attendere almeno 12-24 settimane prima della raccolta. Più a lungo si aspetta, maggiore sarà la resa e più grandi saranno i tartufi. La velocità di colonizzazione, la resa e le caratteristiche variano da una varietà e da una specie all'altra.

Il sottosuolo produrrà più di 100 grammi di tartufi freschi in pochi mesi.