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Kit de cultivo para trufas

Instrucciones:

NO RETIRE EL TAPON MICROFILTRADO DE LA BOLSA DE SUSTRATO

1) El kit incluye:

Bolsa microfiltrada con sustrato de crecimiento y puerto de inyección.

Vial de cultivo liquido de 5 ml.

Jeringuilla de esporas.

Hisopo con alcohol estéril.

Jeringuilla estéril.

2) Vas ha necesitar:

Llama de gas (un mechero tipo soplete va muy bien)

Manos limpias y un área aseada para trabajar.

Las esporas que quieras inocular en el kit.

3) Inoculación:

Tienes dos opciones para inocular el kit de trufas:

A; esporas:

Puedes inyectar las esporas directamente en el sustrato de crecimiento. Esta opción representa un poco menos de trabajo, pero lleva más tiempo que fructifique el kit y no siempre germinan las esporas suficientes. Si escoges esta opción vete directamente al paso 1.)(Ver mas abajo).

B; cultivo líquido:

Para lograr una colonización más rápida y un mayor rendimiento, primero debe inocular y colonizar un vial de cultivo liquido y posteriormente inyectar el cultivo líquido dentro de la bolsa de sustrato de crecimiento. Las esporas que producen trufas pueden requerir mas tiempo para germinar sobre grano que las esporas que producen hongos, de manera que el cultivo liquido puede servir de atajo. Si esta es la opción que has escogido sigue los pasos del B1 al B10, si no ve directamente al punto 1).

B1) Si el medio líquido de cultivo se encuentra refrigerado, retírelo del refrigerador y almacénelo a temperatura ambiente 24 horas antes de usarlo.

B2)   Lávese muy bien las manos (el uso de jabón antibacterial es opcional). Séquese con una toalla limpia (p. ej. con toallas de papel).

B3)   Retire el vial de la bolsa y ubique en una mesa limpia en un área aseada, libre de residuos.

B4)  Aplique alcohol sobre el puerto de inyección del Vial de Cultivo Líquido y cualquier otro lugar destinado a ser inyectado (p. ej. vial de esporas o Vial de Cultivo Líquido). Utilice un hisopo limpio por cada producto que deba humedecer, con el fin de reducir la contaminación mutua. No exhale directamente sobre los sitios de inyección.

B5)   Retire la jeringa y la aguja de la bolsa. Retire la cubierta de plástico que protege la aguja (gire en el sentido de las manecillas del reloj y hale).

No permita que la aguja entre en contacto con ningún objeto, pues de lo contrario deberá volver a ser esterilizada. En caso de utilizar una jeringa de cualquier otro proveedor, ésta deberá también ser esterilizada.

Las agujas pueden ser esterilizadas con una llama. Es deseable que la aguja quede al rojo vivo, teniendo cuidado de no sobrecalentar y derretir el área donde la aguja está adherida al plástico. Siempre deje enfriar la aguja antes de inyectarla

B6)  Si se utiliza un vial de esporas o de Cultivo Líquido colonizado, agite vigorosamente para mezclar la suspensión. Sostenga el vial en un ángulo, inyecte con la jeringa, y extraiga la cantidad deseada de suspensión.

B7)  Inyecte varias gotas de suspensión de cultivo (es decir, líquido colonizado del vial de cultivo) o entre varias gotas y 1 ml de suspensión de esporas (dependiendo de la densidad de la solución de esporas) en el Vial de Cultivo Líquido. Retire la aguja muy lentamente, pues de lo contrario la presión puede ocasionar que un poco del líquido sea rociado afuera—lo cual no representa problema alguno.

B8)  Limpie el puerto de inyección del Vial de Cultivo Líquido con un hisopo limpio humedecido en alcohol; deje secar, y almacene verticalmente en una bolsa plástica de cierre hermético.

B9)   Agite vigorosamente el vial una vez al día durante diez segundos y almacene lejos de la luz solar. Incube las especies de hongos a la temperatura apropiada (generalmente de 23º a 27º C). Una temperatura menor retrasa el tiempo de germinación y colonización de las esporas. Sin embargo, una temperatura demasiado alta (por encima de 27º C) incrementa el riesgo de contaminación.

Nota: Los requerimientos de temperatura dependen de la especie.

B10) El crecimiento es similar tanto con esporas como con Cultivo Líquido. Sin embargo, el crecimiento con esporas tarda más que con éste último.

Suspensión de esporas: Las esporas generalmente tardan entre 24 y 72 horas en germinar, y entre 3 y 7 días deberá ser observable la colonización del medio líquido creciendo en los dos tercios inferiores del vial.

Nota: Los Viales de Cultivo Líquido MycoMate® requieren de muy pocas esporas para su crecimiento.

Cultivo líquido: El crecimiento se hace evidente durante las 24 horas siguientes a la transferencia del micelio desde un vial colonizado de Cultivo Líquido a viales de Cultivo Líquido frescos. Los viales frescos generalmente son colonizados tras varios días (dependiendo de la especie, variedad, y temperatura).

La observación es más efectiva cuando se sostiene con cuidado el vial a trasluz, evitando agitar. El sedimento del medio de cultivo puede agitarse si no se es lo suficientemente cuidadoso, haciendo más difícil identificar el crecimiento (esto no representa problema, pues al rato el sedimento se asentará nuevamente en el fondo). Hilos blancos de micelio (hongo) flotarán hacia la superficie a medida que levanta el vial. Deberá haber una pequeña nubosidad alrededor del micelio, pero el vial completo no debe estar opaco. El área alrededor de la nubosidad del micelio deberá ser razonablemente transparente. Si el vial es levantado lentamente y sin embargo aparece completamente opaco es posible que se encuentre contaminado. Deje reposar el vial sin ninguna perturbación durante varias horas y revise nuevamente para descartar que se trate de sedimento proveniente del fondo lo que oscurecía el vial. Éste puede ser utilizado tan pronto como haya crecimiento saludable o después de una o dos semanas cuando el vial muestre mayor colonización.

Nota: Cuando entre uno y dos tercios del vial han sido colonizados deberá ser utilizado o almacenado bajo refrigeración para uso posterior (ver abajo).

B11)  Cuando la colonización esté completa el vial puede ser usado para inocular otros Viales MycoMate® de Cultivo Líquido (repitiendo los pasos del B1 al B10), Kits MycoMate®  para Hongos Comestibles o Esclerocios (repitiendo los pasos del B1 al B6)

 1) Sostén el puerto de inyección de la bolsa de sustrato con una mano, levanta las dos pestañas plásticas con la otra mano y rasga cuidadosamente la cubierta plástica que protege el puerto de inyección. Aplica alcohol con un hisopo limpio y deja secar.

2) Retira la jeringuilla y la aguja de la bolsa, retira la cubierta de plástico que protege la aguja (gira en el sentido de las manecillas del reloj). No permitas que la aguja entre en contacto con ningún objeto, de lo contrario tendrás que volver a esterilizarla.

Las aguas pueden ser esterilizadas con una llama, es deseable que la aguja quede al rojo vivo, teniendo cuidado de no sobrecalentar y derretir el área donde la aguja esta adherida al plástico, dejar enfriar la aguja antes de inyectar. Evita exhalar sobre la aguja o el área de inyección.

3) Empuja la aguja de la jeringuilla a través del puerto de inyección de la bolsa de sustrato.

Esporas: Utiliza el puerto de inyección para guiar la aguja e inyectar de1 a 2 ml en cada esquina y paralelo a los lados de la bolsa de sustrato. Incluya varias gotas sobre el sustrato mismo. Mientras mas uniforme sea la inyección en el sustrato más rápida será la colonización.

Cultivo líquido: Utiliza el puerto de inyección para guiar la aguja e inyectar de1 a 2 gotas en cada esquina y paralelo a los lados de la bolsa de sustrato. Deja que la solución gotee sobre los lados de la bolsa de sustrato. Incluya varias gotas sobre el sustrato mismo. Cada gota de cultivo representa un punto de crecimiento, por lo tanto cuanto mas uniforme sea la inyección en el sustrato más rápida será la colonización.

4) Colonización:

La temperatura adecuada para incubar la bolsa de sustrato es de entre22ºCy24ºC.

Esporas: En el lapso de varios días a dos semanas las esporas germinaran (pequeñas aglomeraciones de aspecto algodonado) y el hongo colonizara la bolsa en el transcurso de varias semanas. Si la germinación no se encuentra distribuida de manera uniforme a lo largo de la bolsa durante los siguientes14 a 22 días, puede acelerar la colonización mezclando cuidadosamente el contenido de la bolsa. Haga esto una sola vez, de manera que los hongos puedan completar la colonización.

Cultivo liquido: En el lapso de24 a 72 horas el hongo cobrar vida y en el transcurso de una a dos semanas colonizara el sustrato, dependiendo de la especie y la variedad.

5) Cosecha:

Aunque puede empezar a cosechar las trufas antes, es recomendable esperar como mínimo entre 12 y 24 semanas antes de cosechar. Cuanto más tiempo esperes mayor será el rendimiento y mas grandes serán las trufas. La velocidad de colonización, el rendimiento y sus características varían de una variedad y especie a otra.

El Underground producirá más de 100 gramosde trufas frescas en unos pocos meses.